培養(yǎng)基的主要成分有氮源、碳源、無機鹽、水分及一些生長因子,它們主要為細菌的生長繁殖提供營養(yǎng)和生長環(huán)境。
水:水是良好的溶劑,細菌所需要的營養(yǎng)物質(zhì)必須先溶于水,營養(yǎng)的吸收與代謝均需有水才能進行。制備培養(yǎng)基常用不含雜質(zhì)的蒸餾水或離子交換水。
氮源:氮源主要用于構(gòu)成菌體細胞物質(zhì)(氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸等)和含氮代謝物。常用的氮源可分為兩大類:有機氮源和無機氮源。
碳源:碳源是組成培養(yǎng)基的主要成分之一。常用的碳源有糖類、油脂、有機酸和低碳醇。在特殊情況下(如碳源貧乏時),蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物或氨基酸等也可被某些菌種作為碳源使用。
無機鹽:無機鹽是細胞維持生命活動所的營養(yǎng)成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43-、SO42-、HCO3-等,主要作用為維持細胞培養(yǎng)液滲透壓平衡,參與細胞的代謝活動。此外,通過提供鈉,K+和Ca2+,幫助細胞調(diào)節(jié)細胞膜功能。
注意事項:
培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項:
確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、真菌及支原體無菌試驗來確認并排除。
同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。